We investigated the presence of the gene of subtilase cytotoxin (SubAB), described in certain highly virulent verocytotoxigenic E. coli strains, in isolates from Argentina and its relation with other virulence factors. The gene subA was present in eae-negative strains mostly associated with saa, vt2 and ehxA genes.

The aim of this work was to adapt described MLVA protocols to the molecular typing and characterization of VTEC O157:H7 isolates from Argentina. Nine VNTR loci were amplified by PCR showing diversity values from 0.49 to 0.73. Nine MLVA profiles were observed and the cluster analysis indicated both unrelated and closely related VTEC O157:H7 strains. In spite of the limited number of isolates studied, the panel of VNTR used made it possible to perform a first approach of the high genetic diversity of native strains of O157:H7 by MLVA.

A total of 153 Shiga-toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolates from feces of cattle and beef products (hamburgers and ground beef) in Argentina were characterized in this study. PCR showed that 22 (14%) isolates carried stx1 genes, 113 (74%) possessed stx2 genes and 18 (12%) both stx1 and stx2. Intimin (eae), enterohemolysin (ehxA), and STEC autoagglutinating adhesin (saa) virulence genes were detected in 36 (24%), 70 (46%) and in 34 (22%) of the isolates, respectively. None of 34 saa-positive isolates carried the gene eae, and 31 were ehxA-positive. Fourteen (7 of serotype O26:H11 and 4 of serotype O5:H-) isolates had intimin b1, 16 isolates possessed intimin g1 (11 of serotype O145:H- and 5 of serotype O157:H7), 5 isolates had intimin type ε1 (4 of serotypes O103:H- and O103:H2), and one isolate O111:H- showed intimin type θ/g2. Although the 153 STEC isolates belonged to 63 different seropathotypes, only 12 accounted for 58% of isolates. Seropathotype ONT:H- stx2 (18 isolates) was the most common, followed by O171:H2 stx2 (12 isolates), etc. The majority (84%) of STEC isolates belonged to serotypes previously found in human STEC and 56% to serotypes associated with STEC isolated from patients with hemolytic uremic syndrome (HUS). Thus, this study confirms that cattle are a major reservoir of STEC pathogenic for humans. To our knowledge, this is the first study that described the presence of saa gene in STEC of serotypes O20:H19, O39:H49, O74:H28, O79:H19, O116:H21, O120:H19, O141:H7, O141:H8, O174:H21, and ONT:H21. The serotypes O120:H19 and O185:H7 were not previously reported in bovine STEC.

Neste estudo, um total de 153 Escherichia coli produtoras de toxinas Shiga (STEC) isoladas de fezes de gado bovino e de carne moida e hamburgues de carne bovina na Argentina foram caracterizados. Os ensaios de PCR mostraram que 22 (14%) dos isolados possuiam o gene stx1, 113 (74%) o gene stx2 e que 18 (12%) tinham ambos os genes. Os genes de virulência para a intimina (eae), a enterohemolisina (ehxA) e a adesina autoaglutinante de STEC (saa) foram detectados em 36 (24%), 70 (46%) e 34 (22%) dos isolados, respectivamente. Nenhum dos 34 isolados saa-positivos tinham o gene eae, no entanto 31 eram ehxA-positivos. Catorze isolados (7 do serótipo O 26:H11 e 4 do serótipo O5:H-) tinham a intimina b1, 16 possuiam a intimina g1 (11 do serótipo O145:H- e 5 do serótipo O157:H7), 5 isolados foram positivos para a intimina tipo ε1 (4 dos serótipos O103:H- e O103:H2), e um isolado O111:H- apresentou a intimina tipo θ/g2. Enquanto os 153 isolados de STEC pertenciam a 63 seropatótipos, somente 12 representaram 58% dos isolados. O seropatótipo ONT:H- stx2 (18 isolados) foi o mais comum, seguido pelo O171:H2 stx2 (12), etc. A maioria dos isolados (84%) de STEC pertenciam à serótipos encontrados previamente em seres humanos e cêrca de 56% à serótipos associados com STEC isolados de pacientes com a síndrome urémica hemolítica (HUS). Esses dados confirmam que o gado bovino é um importante reservatório de STEC patogênicos para humanos. Segundo nossa informação, este é o primeiro estudo que descreve a presença do gene saa em STEC dos serótipos O20:H19, O39:H49, O74:H28, O79:H19, O116:H21, O120:H19, O141:H7, O141:H8, O174:H21, e ONT:H21. Os serótipos O120:H19 e O185:H7 também não haviam sido descritos previamente em STEC de origem bovina.

En este estudio hemos caracterizado un total de 153 Escherichia coli productores de toxinas Shiga (STEC) aisladas de las heces de ganado bovino y de carne picada y hamburguesas de vacuno en Argentina. Los ensayos de PCR mostraron que 22 (14%) aislamientos llevaban el gen stx1, 113 (74%) presentaban el gen stx2 y que 18 (12%) tenían ambos genes. Los genes de virulencia para la intimina (eae), la enterohemolisina (ehxA) y la adhesina autoaglutinante de STEC (saa) fueron detectados en 36 (24%), 70 (46%) y 34 (22%) de los aislamientos, respectivamente. Ninguno de los 34 aislamientos saa-positivos llevaba el gen eae, pero 31 eran ehxA-positivos. Catorce aislamientos (7 del serotipo O26:H11 y 4 del serotipo O5:H-) tenían la intimina b1, 16 poseían la intimina g1 (11 del serotipo O145:H- y 5 del serotipo O157:H7), 5 aislamientos eran positivos para la intimina tipo ε1 (4 de los serotipos O103:H- y O103:H2), y un aislamiento O111:H- mostró la intimina tipo θ/g2. Aunque los 153 aislamientos de STEC pertenecían a 63 seropatotipos, sólo 12 constituían el 58% de los aislamientos. El seropatotipo ONT:H- stx2 (18 aislamientos) fue el más común, seguido por el O171:H2 stx2 (12 aislamientos), etc. La mayoría de los aislamientos (84%) de STEC pertenecían a serotipos encontrados previamente en seres humanos y el 56% a serotipos asociados con STEC aislados de pacientes con el síndrome urémico hemolítico (HUS). Por tanto, este estudio confirma que el ganado bovino es un importante reservorio de STEC patógenos para humanos. Según nuestra información, este es el primer estudio que describe la presencia del gen saa en STEC de los serotipos O20:H19, O39:H49, O74:H28, O79:H19, O116:H21, O120:H19, O141:H7, O141:H8, O174:H21, y ONT:H21. Los serotipos O120:H19 y O185:H7 tampoco habían sido descritos previamente en STEC de origen bovino.

The hemolytic-uremic syndrome (HUS) is a multisystemic disorder that is characterized by the onset of acute renal failure, microangiopathic hemolytic anemia and thrombocytopenia. It is the most common cause of acute renal failure and the second cause of chronic renal failure and renal transplantation in children in Argentina. Our country has the highest incidence of HUS in the world, with approximately 420 new cases observed each year with an incidence of 12.2 cases per 100 000 children in the age group 0-5 years. Numerous etiologic factors have been associated with HUS but the infection with enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) is considered the most common cause. The majority of outbreaks and sporadic cases in humans have been associated with serotype O157:H7, although other O:H serotypes have been isolated, and they are a subgroup of Verocytotoxin-producing Escherichia coli (VTEC). Cattle are the principal reservoir of VTEC. Infections in humans are a consequence of consumption of undercooked meat, raw milk and other contaminated food or water. Direct contact with animals or people infected is another source of infection.

El síndrome urémico hemolítico (SUH).es un desorden multisistémico caracterizado por presentar insuficiencia renal aguda, anemia hemolítica microangiopática y trombocitopenia. Constituye la principal causa de insuficiencia renal aguda y la segunda causa de insuficiencia renal crónica y de transplante renal en niños en la Argentina. Actualmente, nuestro país presenta el registro más alto de SUH en todo el mundo, con aproximadamente 420 casos nuevos declarados anualmente y una incidencia de 12.2/100 000 niños menores de 5 años de edad. Se reconocen múltiples agentes etiológicos, aunque se considera a la infección por Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) como la principal etiología de SUH. La gran mayoría de brotes epidémicos y casos esporádicos en humanos se han asociado con el serotipo O157:H7, aunque otros serotipos han sido también aislados, y éstos son un subgrupo de E. coli verocitotoxigénico (VTEC)..El bovino es considerado el principal reservorio de VTEC. El contagio al hombre frecuentemente se debe al consumo de alimentos cárneos y lácteos contaminados, deficientemente cocidos o sin pasteurizar, o al contacto directo con los animales o con sus heces, consumo de agua, frutas o verduras contaminadas. También puede producirse contagio mediante el contacto interhumano.

No presente estudo, a PCR foi utilizada para detectar leptospiras em urina humana. Diversas abordagens para processamento de amostra foram avaliadas para otimizar a detecção de leptospiras em urina misturada com esta bactéria. Além disso, algumas mudanças na composição da mistura de reação foram analisadas. Não se observou amplificação em urina ácida, conseqüentemente, a neutralização da amostra imediatamente após a coleta é fortemente recomendada. PBS apresentou melhores resultados que Tris ou NaOH como reagentes neutralizadores. Congelamento e descongelamento de amostras antes do processamento produziram resultados negativos. Eliminação de células epiteliais, leucócitos e cristais por centrifugação a 3.000rpm, à temperatura ambiente, aumentou a sensibilidade. Ademais, ambas, a etapa de lavagem após a coleta de leptospiras por centrifugação e a inclusão de albumina de soro bovino a 0,1% na mistura de reação minimizaram a interferência de outros compostos inibidores. Essas modificações contribuíram para melhorar a detecção de Leptospira em urina através da PCR.

In the present study PCR was applied to detect leptospires in human urine. Several approaches for sample processing were evaluated to optimize the detection of leptospires in urine mixed with this bacterium. Furthermore, some changes in the composition of the reaction mix were studied. No amplification was observed in acidic urine, therefore neutralization of the sample immediately after collection is strongly recommended. PBS gave better results than Tris or NaOH as neutralizing reagents. Freezing and thawing of samples before processing yielded negative results. Elimination of epithelial cells, leukocytes and crystals by centrifugation at 3,000 rpm at room temperature increased sensitivity. In addition, both the washing step after collecting leptospires by centrifugation and the inclusion of 0.1% bovine serum albumin in the reaction mix minimized the interference of other inhibitory compounds. These modifications were useful to improve the detection of Leptospira in urine by PCR.

Diferenciação das leptospiras patogênicas e não patogênicas por PCR Utilizou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificar leptospiras patogênicas isoladas, na Argentina, de animais e do homem. Foram usados dois pares de primers (G1/G2; B64-I/B64-II), descritos anteriormente como apropriados para amplificar amostras pertencentes aos diferentes sorogrupos de Leptospira interrogans. Através deste método não se detectaram as leptospiras saprófitas (L. biflexa) isolados de água e solo. Este fato representa uma vantagem uma vez que possibilita a diferenciação de leptospiras patogênicas das não patogênicas em culturas. A sensibilidade da prova foi determinada, verificando-se que ela permitiu detectar 10 leptospiras por tubo de reação. Os tamanhos dos fragmentos amplificados foram de 285 ou 360 pares de bases (bp), dependendo da amostra patogênica estudada

A polymerase chain reaction was carried out to detect pathogenic leptospires isolated from animals and humans in Argentina. A double set of primers (G1/G2, B64-I/B64-II), described before, were used to amplify by PCR a DNA fragment from serogroups belonging to Leptospira interrogans but did not allow to detect saprophytic strains isolated from soil and water (L. biflexa). This fact represents an advantage since it makes possible the differentiation of pathogenic from non-pathogenic leptospires in cultures. The sensitivity of this assay has been determined, allowing to detect just only 10 leptospires in the reaction tube. Those sets of primers generated either a 285 bp or 360 bp fragment, depending on the pathogenic strain